本发明提供了一种条件性mTERT过表达的小鼠模型的构建方法及其应用。该构建方法包括：通过无缝克隆的技术构建打靶载体，该打靶载体包含3 .3kb 5 '同源臂、CAG启动子、loxp‑stop‑loxp、TERT‑3XFlag‑IRES‑EGFP‑WPRE‑polyA和3.3kb 3'同源臂；将Cas9 mRNA、gRNA和上述打靶载体显微注射到野生型小鼠的受精卵中，获得F0代小鼠，并鉴定出同源重组阳性F0代小鼠，回交后繁育获得F1代小鼠，即为条件性mTERT过表达的小鼠模型。本发明提供的构建方法构建的小鼠可以与不同的Cre工具鼠交配，实现在全身各种组织器官、细胞类型中的特异性过表达。该鼠可用于研究胚胎和神经发育、衰老、创伤修复、肿瘤发生发展和治疗的多种转基因模型造模，且与CreERT工具鼠的交配可以通过他莫昔芬控制TERT过表达的时间。
