本发明涉及NY-ESO-1特异的TCR及其制备方法,用人工果蝇抗原提呈细胞负载NY-ESO-1抗原肽,激活CD8+T细胞产生CTL细胞,产生的细胞毒性CTL细胞经流式分选仪用HLA-A*02:01 NY-ESO-1 Tetramer-SLLMWITQC-APC(MBL,TS-M011-2)及CD8-FITC荧光双染、进行流式检测,筛选收集双阳性的CTL细胞,将分选得到的CTL细胞进行单细胞TCR基因测序,测得TCRα和β可变区基因序列,将TCR基因进行优化及设计,将TCR基因的恒定区改为鼠源,并加上信号肽,得到TCRα和β链的全基因序列,基因合成TCR α和TCR β链,以IRES序列连接TCR α和TCR β链,使TCRα和TCR β链在一个质粒中共同表达,得到TCR基因,将TCR基因进行真核表达。